顯微鏡觀(guān)察方法

（一）光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察法

   1.插片法 適用于觀(guān)察放線(xiàn)菌的自然生長(cháng)狀態(tài)

   在適合菌種生長(cháng)的固體培養基上，涂布接種觀(guān)察的菌株，然后用攝子把滅過(guò)菌的蓋玻片以45°角插入平板中，然后置適宜的生長(cháng)溫度培養（一般一個(gè)平板可插6～8片）。 在不同生長(cháng)期取出蓋玻片，用結晶紫染lmin、水洗、干燥，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察，攝像。

   2.蓋片法

   用適合菌種生長(cháng)的固體培養基倒平板，涂布接種上需觀(guān)察的菌株，然后用無(wú)菌小刀在平板正中間切去1cm左右的瓊脂塊，用鑷子夾一塊無(wú)菌載玻片蓋于有溝的瓊脂平板上，置適當溫度下培養。菌株會(huì )沿玻片生長(cháng)。生長(cháng)好后取出載玻片，結晶紫染色1 min、水洗、干燥。在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察到生長(cháng)完整的氣生菌絲體，同時(shí)攝影。

（二）透射電子顯微鏡觀(guān)察法

   1.材料

   透射電鏡一臺，載樣銅網(wǎng)膜，火棉膠。

   2.方法

   （1）火棉膠準備：2g火棉膠溶于100 ml醋酸異戊酣中。

   （2）載樣膜的制備：先把銅網(wǎng)膜用濃硫酸浸漂2min,再用水洗數次，最后將洗凈的銅網(wǎng)膜鋪在有濾紙的培養皿中。輕輕注入無(wú)菌水，取配好的火棉膠液滴一滴在水面上，由于火棉膠在水面上的表面張力形成一薄膜，將第一、二次的膜除掉，薄膜形成后迅速用吸管在培養皿的邊緣處吸去水分，直至吸干，使膜緊緊貼在銅網(wǎng)上為止，室溫干燥備用。

   （3）點(diǎn)樣：用生長(cháng)豐茂的菌株制成菌懸液，用毛細管吸取菌液并滴在銅網(wǎng)上。也可以用貼印法，即用制好的銅網(wǎng)在有氣生菌絲體的菌塊上輕輕印一下，然后，在光學(xué)顯微鏡下先檢查一下網(wǎng)是否完整，及蔭是否貼上或分布均勻。然后噴碳或投影（通常用于細菌鞭毛觀(guān)察），便可在透射電子顯微鏡下觀(guān)察或攝影。

（三）掃描電鏡觀(guān)察法

   掃描電鏡可以觀(guān)察到菌體表面的立體形象，它通過(guò)三維形象逼真地反映出樣品表面結構的凹凸不平，如細菌的形態(tài)、鞭毛結構、放線(xiàn)菌孢子的表面裝飾物等都以立體狀反映出來(lái)。

   1.材料

   掃描電鏡一臺，臨界點(diǎn)干燥器，白金粉，戊二醛，乙醇。

   2.方法

   菌株培養于適宜生長(cháng)的平板培養基上-待生長(cháng)好后用小刀切成0.5～0.7cm3的方塊一然后小刀削薄→置瓷染色盆中→立即加2.5％戊二醒固定1.5h→吸去戊二醛→分別加30%、50%、70%、90%、100％乙醇各脫水15min→取出放于圓形容器中→臨界點(diǎn)干燥1h→取出貼于一圓形銅片上→白金濺射噴鎖，厚度約2～5mm→置掃描電鏡下觀(guān)察及攝影。

   本文節選自《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》第十二章。

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