實(shí)驗用品的滅菌方法簡(jiǎn)介

  微生物實(shí)驗室常用的培養皿、三角瓶、吸管、試管、過(guò)濾器必須徹底滅菌，否則會(huì )影響實(shí)驗結果。

一、實(shí)驗用品的滅菌

  1.高壓蒸氣滅菌。高壓蒸氣滅菌用121℃蒸氣壓力滅菌20-30min即可。高壓蒸氣滅菌后， 玻璃器皿上常常帶有水珠，可再用烘箱烘干。

  2.干熱滅菌干熱滅菌用烘箱。通常于150-160℃滅菌2小時(shí)。溫度不可過(guò)高，超過(guò)180℃時(shí)棉塞和紙張易烤焦起火。器皿放入烘箱之前必須是干燥的，以免引起玻璃的破碎。器皿在烘箱內不宜過(guò)滿(mǎn)，應留有一定的空隙。溫度應從室溫逐漸升至所需溫度。結束后也應逐步降溫直至低于60℃時(shí)才可開(kāi)門(mén)取出滅菌的器皿，否則玻璃可能因突然遇冷而破碎。

二、培養基的滅菌

  培養基的滅菌可用濕熱滅菌或過(guò)濾滅菌。濕熱滅菌有高壓蒸氣滅菌和常壓蒸氣滅菌兩種。

 （1）高壓蒸氣滅菌在高壓蒸氣滅菌器中進(jìn)行，利用提高蒸氣壓力而使溫度增高的作用，因而提高了蒸氣滅菌效力。蒸氣壓力和溫度關(guān)系見(jiàn)表11-2。

上表所列的溫度是飽和蒸氣壓力下的溫度。但如高壓蒸氣滅菌器中的空氣未排凈，那么實(shí)際溫度就達不到應有的溫度。例如，完全不排除滅菌器中的空氣，當表壓為1kg/cm2，實(shí)際溫度僅為100℃；如排除滅菌器中1/2的空氣，當表壓為1kg/cm2氣實(shí)際溫度僅為112℃。因此使用高壓蒸氣滅菌時(shí)務(wù)必將其中空氣全部排除，才能達到預期效果。一般培養基滅菌時(shí)大多使用1kg/cm2，15～20·min。如滅菌器中裝填較滿(mǎn)、培養基裝量較大(1L以上）或培養基污染雜菌較多（如蚨皮）時(shí)，可適當延長(cháng)滅菌時(shí)間達30min。個(gè)別情況下可用1 kg/cm2以上的蒸氣壓力滅菌。培養基中如含有高溫時(shí)易分解破壞的物質(zhì)（如某些含糖培養基），可采用較低的壓力，如0.6～0.8kg/cm2。配制這種培養基時(shí)應盡量減少雜菌污染。所用的試管或三角瓶及其棉塞應先行滅菌。培養基中其他的耐熱成分也可先行高壓滅菌。加入不太耐熱組分，分裝后再用較低壓力滅菌。

 （2）常壓蒸氣滅菌也稱(chēng)作間歇蒸氣滅菌，用于在100℃以上易千破壞的培養基的滅菌，如牛奶、明膠等。常壓蒸氣滅菌也就是用蒸氣蒸。在滅菌器中溫度升到100℃時(shí)，在不加壓力的情況下使水保持沸騰，即保持lOO℃30 min。取出滅菌的培養基，放室溫或保溫箱中。第二、三日連續如上法于100℃各滅菌30min即可。細菌的營(yíng)養體可在可在第二日的100℃30min殺死。第三日再將少數殘留的細菌殺死，這樣可達到完全滅菌的目的。

 （3）過(guò)濾滅菌用于不能用熱滅菌的培養基， 如某些易破壞或易揮發(fā)的物質(zhì)。常用的除去細菌的過(guò)濾器有賽氏過(guò)濾器和微孔膜過(guò)濾器。這兩種過(guò)濾器的形式大致相同，只是過(guò)濾板不同。過(guò)濾細菌用的賽氏過(guò)濾器的規格為EK,微孔膜的規格為0.22～0.45μm。使用前，將過(guò)濾器連同吸濾瓶等按無(wú)菌操作的要求裝好，用紗布包好，高壓蒸氣滅菌。使用時(shí)用真空泵抽氣吸濾，不可將漏斗中的液體抽干。使用過(guò)的濾板需棄去。有的微量物質(zhì)，如指示劑顏色等可能被濾板吸附，從培養基中損失掉。賽氏過(guò)濾板尤其易吸附微量物質(zhì)，使用時(shí)應注意。

  本文節選自《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》第十一章。

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