注射用炎琥寧的細菌內毒素檢查方法確認

【摘要】  目的：建立注射用炎琥寧細菌內毒素檢查方法。方法：按《中國藥典》2005年版(二部)附錄收載的細菌內毒素檢查方法及指導原則進(jìn)行實(shí)驗。結果：注射用炎琥寧經(jīng)1→40倍稀釋后對鱟試劑無(wú)干擾作用。結論:細菌內毒素檢測方法可用于注射用炎琥寧的熱原檢查。 

【關(guān)鍵詞】  細菌毒素 鱟試劑 炎琥寧 HtPot10恒溫金屬浴 

     注射用炎琥寧具有清熱、解毒、抗炎的功能，臨床應用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。臨床用藥廣泛，又常用于靜脈滴注，現標準為進(jìn)行熱原檢查［１］，由于細菌內毒素檢查具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，重現性好的優(yōu)點(diǎn)�，F將細菌內毒素法代替熱原檢查法。 

    1  儀器與試劑 

混勻器；HtPot10恒溫金屬浴(合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司)；無(wú)熱原吸頭，微量移液器。 

    細菌內毒素工作品(CSE，效價(jià)70EU/支，批號2005��3，中國藥品生物制品檢定所)；鱟試劑(TAL，靈敏度0.125EU/ml，批號051109，050210，湛江安度斯生物有限公司)；細菌內毒素檢查用水(批號200050208，含量≤0.03EU/ml，湛江海洋生物制品檢定廠(chǎng))；注射用炎琥寧(供試品，規格每支0.2g，批號051209、0501018、050926，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司)。 

    2  方法與結果 

    2.1  鱟試劑靈敏度(λ)復核  按細菌內毒素檢查法［２］，用BET水將細菌內毒素工作標準品稀釋成2、1、0.5、0.25λ4個(gè)濃度進(jìn)行實(shí)驗。結果表明，靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑符合規定。見(jiàn)表1。將表1數據代入公式λc=lg-1∑xini  λc=0.125。表1  鱟試劑靈敏度復核實(shí)驗結果（略）

　　2.2  注射用炎琥寧細菌內毒素限值(L)的確定  L=K/M，式中K為規定的給藥途徑，人用每千克體重每1h可接受的內毒素最大劑量，注射劑的K=5.0EU/kg·h；M為人用每千克體重每1h給藥的最大劑量，經(jīng)計算，供試品M=1.0ml/kg·h，因此細菌內毒素理論限值為：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。 

    2.3  供試品的最大有效稀釋倍數(MVD)  選用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑時(shí)，MVD=Lλb=50.125=40倍。 

2.4  供試品干擾初篩試驗  用BET水將注射用炎琥寧(批號051209)分別稀釋成原液、1→10、1→20、1→40系列濃度，以各稀釋濃度供試品將細菌內毒素工作標準品稀釋成2、1、0.5、0.25λb4個(gè)濃度的內毒素溶液，與鱟試劑混合進(jìn)行抑制/增強試驗，結果表明，供試品在較高濃度時(shí)對鱟試劑有干擾作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝臟等臟器與功能，是導致肝細胞局灶或彌漫性壞死的主要原因。肝細胞可出現局灶或彌漫性壞死，門(mén)脈周?chē)�纖維化。在供試品至少1→40稀釋后則對鱟試劑無(wú)干擾作用，

3小結

注射用炎琥寧為中藥注射液，為大分子物質(zhì)。在預試驗中，供試品的原液、1-10、1-20稀釋液對標示靈敏度為0.5EU/ml和0.25EU/ml的鱟試劑有抑制作用，故選擇標示靈敏度為0.125EU/ml或靈敏度更小的鱟試劑。由本試驗可知，只需將供試品至少1-40稀釋?zhuān)瑢�鱟試劑的抑制作用即消失。

不同鱟試劑對供試品的反應有差異。本實(shí)驗采用兩種不同癖好的鱟試劑同時(shí)進(jìn)行試驗，得到了較為滿(mǎn)意結果。

本試驗結果證實(shí)，細菌內毒素檢查法可替代注射用炎琥寧的熱源檢查，檢查時(shí)只要將至少1-40稀釋?zhuān)�選擇相應靈敏度的鱟試劑即可進(jìn)行。

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